动态浊度法是测定内毒含量的一种非常重要的方法

来源:http://www.shuizhifenxi.com/ 作者:余氯检测仪 时间:2018-07-26

  细菌内毒素检查法通常也被人们称为鲎试验法,这种方法通常是用来对供试品当中内毒素含量的限定能否满足相关标准和规定的一种非常重要的方法,当前,国内外比较常见的有凝胶法、浊度法和显色法,在最新一版的中国药典当中将动态浊度法规定为测定内毒含量的一种非常重要的方法,这种方法主要是内毒素和鲎试验当中的炭原子发生反应之后,被集火的凝固酶阻断了胶原蛋白当中的精氨酸肽链,这样也就构成了凝固蛋白。

  1、材料

  血塞通注射液,规格:2mL∶100mg,批号:99006,990311,990301,990415, 980954,云南昆明兴中制药厂。鲎试剂K4981L,规格:每瓶5.2mL,美国ENDOSAFE。细胞内毒素国家标准品,批号981(每支9000EU),中国药品生物制品检定所。细菌内毒素检查用水7L95S,500mL,天津大冢制药有限公司。BET-32C型细菌内毒素测定仪,天津大学无线电厂生产。

  2、方法与结果

  2.1细菌内毒素限值的确定

  按照相关规定当中注明的公式内容对最小的热阈值进行计算,在计算之后得到的血塞通注射液内毒素限值为10EU/ml。

  2.2标准曲线制作及可靠性

  采用检查用水将标准品进行10倍和2倍的稀释处理,从而使内毒素浓度分别达到0.25、0.125、.0.0625、0.0313、0.0156和0.0078EU/ml稀释系列,分别精确的量取2ml溶液,之后将其加入到已经装油浓度为1mol/ml的鲎试剂反应试管当中,将其均匀的混合在一起,同时还要插入BET-32C细胞内的毒素与测定仪内对其进行全面的检测,其中每一个浓度要重复的检测三次,结果如表1所示:

  最低的浓度为0.0078EU/ml,同时空白对照管在检测时间之外,所以我们基本可以判断标准曲线完全成立。

  2.3干扰试验

  2.3.1样品稀释倍数的计算

  按照公式对其进行了计算,标准曲线的最低浓度为0.0078EU/ml,通过计算得到样品试验过程中最大有效稀释的倍数为1280倍。

  2.3.2样品溶液配制及预干扰试验

  在试验的过程中将血塞通注射液采用内毒素检查用水将其稀释到20、40、、80、160和320倍,将其记为Ai液,此外还要另外取5管用同样的倍数对其进行稀释处理,同时还要在稀释液当中加入使得细菌内毒素标准液,标准液的浓度为0.0625EU/ml,的细菌内毒素不熬准液,同时还要将其当做阳性对照管,将其记录为B i液,分别取上述各液体0.2ml预先加入了0.1ml鲎试剂反应当中,同时将其均匀的在管内混合之后放入到细菌内菌素测定仪内对其进行全面的测定,其中每一个浓度重复2管,同时还要对平均的回收率进行全面的计算,回收率的结果如表2所示,标准曲线

  2.4干扰试验与热源检查

  取4批血塞通注射液,同时将其分别稀释到160被,同时还要制备阳性对照和标准曲线各个浓度系列,同细菌内毒素测定仪对其进行检测,每一个浓度点重复2管,此外还设置了空白对照,另外4批样品同时开展热源检查,结果如表3所示,标准曲线:

  结果发现:4批血塞通注射液的回收率均在50%~200%范围内,表明无干扰影响,因此作为日常检验选用160倍即可。

  3、讨论

  3.1 由血塞通注射液的干扰试验结果发现:样品溶液在80倍以下存在很强的抑制作用,从80倍开始已无干扰,而在160倍时能得到更好的回收率,同时160倍也正好是添加内毒素浓度λm时的试验稀释倍数,因此日常检查时取160倍稀释液进行。

  3.2血塞通注射剂的药理毒理

  1)抗脑缺血作用:本品50mg/kg、100mg/kg、150mg/kg腹腔注射能改善多发性脑梗死大鼠的脑水肿,促进脑软化灶的胶质细胞反应,加速软化灶的吸收,可使海马区神经元病变减轻。对沙土鼠短暂性脑缺血海马迟发性神经元损伤有一定的保护作用,可降低缺血后脑组织Ca[sup]2+[/sup]含量,减少死亡神经元数量,增加神经元密度。

  2)抗心肌缺血作用:本品静滴14天治疗冠心病心绞痛患者,可使变化的ST-T段恢复,调整心电的不均一性。

  3)其他作用:本品静滴治疗,可见冠心病、脑梗塞、II型糖尿病、肺心病等症患者的血液流变学指标改善,全血粘度和血浆粘度降低,血细胞比容和血小板聚集率减少,血沉速度减慢,纤维蛋白原含量减少。表明本品有改善流变性作用。本品还可使脑梗死患者、原发性高血压患者甲襞微循环形态积分、流态积分、半周积分、总体积分降低;可使原发性高血压患者袢周渗出明显减少,管径缩小,流速增加,红细胞聚集性下降,袢顶淤张减轻以及管袢清晰度增加,水肿消退。表明本品有改善微循环作用。

  参考文献:

  [1]刘彩君,胡翮.动态浊度法测定小牛血去蛋白提取物注射液细菌内毒素含量[J].中国药师.2012(07)

  [2]苏惠虹,沈小卓.低分子肝素钙注射液的动态浊度法检测研究[J].亚太传统医药.2011(01)

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